Coomassie Brilliant Blue R-250 یکی از رایج ترین شکل های رنگ کوماسی است که یک جزء کلیدی از انواع لکه های ژل پروتئین رنگ سنجی است.
رنگهای Coomassie R-250 و G-250 دو شکل شیمیایی از ترکیب تری فنیل متان دی سولفونه هستند که معمولاً به عنوان پایه لکهها برای تشخیص پروتئینها در الکتروفورز ژل و معرفهای سنجش نوع برادفورد برای تعیین کمیت پروتئین استفاده میشوند. فرم R-250 (قرمز رنگ) فاقد دو گروه متیل است که در فرم G-250 (رنگ سبز) وجود دارد که به آن رنگ کوماسی کلوئیدی نیز می گویند. به طور معمول، لکه های ژل کوماسی و معرف های سنجش پروتئین به صورت محلول های بسیار اسیدی در متانول 25 تا 50 درصد فرموله می شوند. در شرایط اسیدی، رنگ عمدتاً از طریق اسیدهای آمینه بازی (عمدتاً آرژنین، لیزین و هیستیدین) به پروتئین ها متصل می شود و تعداد لیگاندهای رنگ کوماسی متصل به هر مولکول پروتئین تقریباً متناسب با تعداد بارهای مثبت موجود در پروتئین است.
ویژگیهای رنگهای Coomassie Brilliant Blue R-250 و G-250:
• تشخیص آسان - ایجاد کمپلکسهای رنگی شدید با پروتئینها
• حساسیت بالا - میتواند حداقل 0.5 میکروگرم بر سانتیمتر مربع از پروتئین موجود در ماتریکس ژل را تعیین کند •
رنگآمیزی برگشتپذیر - آنیون از Coomassie Brilliant Blue تشکیل شده در محیط رنگ آمیزی اسیدی با گروه های آمینه پروتونه شده پروتئین ها با برهمکنش الکترواستاتیکی ترکیب می شود.
کمپلکس حاصل تحت شرایط مناسب برگشت پذیر استهنگامی که در بافر سیترات 0.01M در pH 3.0 حل می شود، حداکثر جذب در 555nm دارد. کمپلکس پروتئین-رنگ با پیک کمی گسترده تر از رنگ آزاد با حداکثر 549 نانومتر مشخص می شود.
تفاوت بین کماسی برلیانت بلو R250و G250 درچیست؟
کماسی برلیانت بلو R250 محبوب تر است زیرا در الکتروفورز جهت رنگ آمیزی آبی مایل به قرمز به مقدار بسیار ناچیز 0.1 میکروگرم استفاده میشود. ولی در کماسی G250 که رنگ آبی مایل به سبز دارد جهت رنگ آمیزی پروتئین های محلول استفاده میشود.
کماسی برلیانت بلو G250 چگونه به پروتئین متصل میشود؟
CBB R-250 و مشتق دی متیل CBB G-250 رنگهای تری فنیل متان دی سولفونه هستند که نوارهای پروتئینی را به رنگ آبی روشن رنگ می کنند. رنگها از طریق برهمکنش الکترواستاتیکی با اسیدهای آمینه پایه پروتونه شده (لیزین، آرژنین و هیستیدین) و با پیوندهای آبگریز با بقایای معطر متصل می شوند.
آیا میتوان در معرف برادفورد از کماسی برلیانت بلو R250 استفاده کرد؟
Coomassie Blue R-250 علاوه بر این در سنجش برادفورد برای تعیین کمیت غلظت پروتئین در یک محلول مانند لیزات سلولی استفاده می شود . یک رنگ با اثر سریع و حساس که می تواند روی ژل های SDS، ژل های IEF و ژل های استاندارد استفاده شود.
کماسی برلیانت بلو چگونه کار می کند؟
رنگ Coomassie Brilliant Blue G-250 دارای سه شکل آنیونی (آبی)، خنثی (سبز) و کاتیونی (قرمز) است. در یک محیط اسیدی، رنگ قرمز پس از اتصال به پروتئین مورد نظر به شکل آبی خود تبدیل می شود. اگر هیچ پروتئینی به رنگ متصل نشود، محلول قهوه ای باقی می ماند.
مشخصات فنی:
Coomassie Brilliant Blue R-250
PubChem CID 23693030
ساختار ساختارهای مشابه را پیدا کنید
فرمول مولکولی C 45 H 45 N 3 NaO 7 S 2 +
مترادف ها Coomassie blue R-250 Coomassie Brilliant Blue R-250
وزن مولکولی 827.0