آنزیم کلاژناز پروتئاز یک پروتئین مارپیچ سه گانه به نام کلاژن را شکاف می دهد. سه نوع کلاژناز بافت وجود دارد و اینها متعلق به خانواده متالوپروتئینازهای ماتریسی (MMP) هستند. کلاژناز به دست آمده از Clostridium histolyticum فعالیت بسیار قوی دارد ، زیرا کلاژن را از هر دو انتها هضم می کند ، در دماهای کم 4-10 درجه سانتی گراد. مخلوط های کلاژناز خام حاوی دو نوع آنزیم اصلی یعنی کلاژناز و کلستریپین هستند.
آزمیران به عنوان وارد کننده محصولات سیگما آلدریچ آمادگی دارد آنزیم کلاژناز از از کلستریدیوم هیستولیتیکوم سیگما آلدریچ 500 میلیگرمی کد C0130 را با قیمت ویژه و در انواع بسته بندیها مختلف در فروش اینترنتی خود در اختیار محققین دانشجویان و اساتید دانشگاهها قرار دهد.
· نام مترادف : کلستردیوپپتیداز A
· فرمول : NiSO4 · 6H2O
· شماره Cas : 9001-12-1
· جرم وزنی : 68.000 تا 125.000
· کد کالا : C0130
· بسته بندیهای موجود : 100 میلیگرمی 500 میلیگرمی 1 گرمی و 5 گرمی
· ساخت شرکت سیگما آلدریچ آمریکا
خصوصیات ظاهری:
· شکل ظاهری پودر لیوفیلیزه بدون نمک
· دارای pH بهینه 6.3 تا 8.8
· انحلال پذیری با بافر TESCA
· دمای نگهداری 20-
موارد مصرف :
· آزمایشگاههای بیوشیمی ، آزمایشگاههای تحقیقاتی ، جداسازی سلولی
کاربرد :
• کلاژناز از Clostridium histolyticum کاربرد گسترده ای در مطالعات بیولوژیکی دارد ، جایی که از آن برای تهیه سوسپانسیون سلولهای جدا شده استفاده می شود. این محصول برای تفکیک تومورهای انسانی ، کلیه موش ، مغز بالغ و جنین انسان ، ریه و بسیاری از بافتهای اپیتلیمی دیگر مناسب است. همچنین نشان داده شده است که در مطالعات پرفیوژن کبد و کلیه ، هضم لوزالمعده ، جداسازی سلولهای کبدی موش غیر پارانشیمی و آماده سازی کبدی موثر است. کلاژناز همچنین در تهیه بافت شریانی برای مطالعه محصولات نهایی گلیکوزیلاسیون پیشرفته استفاده شده است. این آنزیم برای آزاد سازی هپاتوسیت ها با غلظت تقریبی 1 میلی گرم در میلی لیتر آزمایش شده است. غلظت هضم از 0.1 تا 5 میلی گرم در میلی لیتر است.
اقدامات بیوشیمی / فیزیولوژی:
• محصول کلاژناز ترکیبی از آنزیم های ترشح شده توسط C. histolyticum است ، با محصولات مختلف با نسبت های نسبی 10-18 مؤلفه موجود در آنزیم های ترشح شده. اجزای اصلی دو کلاژناز ، کلستریپین و پروتئاز خنثی هستند. عمل هم افزایی این آنزیم ها باعث تخریب کلاژن و سایر مواد درون سلول می شود. عمل هر دو آنزیم کلاژناز و پروتئیناز خنثی برای آزاد سازی موثر سلول ها از بافت ضروری است. انواع مختلفی از کلاژن بسترهای طبیعی کلاژناز هستند.
• کلاژناز توسط چهار گرم کلسیم اتم در هر آنزیم مول فعال می شود. این ماده توسط اتیلن گلیکول بیس (بتا آمینوتیلی ل اتر) - N ، N ، N ′ ، اسید N-tetraacetic ، بتا مرکاپتواتانول ، گلوتاتیون ، تیوگلیکولیک اسید و 8-هیدروکسی کینولین مهار می شود.
احتیاط
• همانطور که عرضه شد ، این محصول برای یک سال در دمای -20 درجه سانتیگراد پایدار است. در FALGPA یا فعالیت پروتئاز در 30 روز در دمای 37 درجه سانتیگراد ، 50 درجه سانتیگراد و -20 درجه سانتیگراد هیچ تلفاتی مشاهده نمی شود. اگر محلول های کلاژناز خام به سرعت در نقض (با 10 میلی گرم در میلی لیتر) منجمد شوند و در دمای 20 درجه سانتیگراد منجمد شوند ، پایدار هستند. چرخه انجماد بیشتر به محلول آسیب می زند. این محصول 100٪ فعالیت را در مدت نگهداری 7 ساعت در یخ نگه می دارد.
تعریف واحد
• یک واحد هضم کلاژن (CDU) پپتیدها را از کلاژن از معادل تاندون آشیل گاو در رنگ نینیدرین تا 1.0 میکرومول لوسین در 5 ساعت در pH 7.4 در دمای 37 درجه سانتیگراد در حضور یون های کلسیم آزاد می کند. یک واحد هیدرولیز FALGPA 1.0 میکرومول از furylacryloyl-Leu-Gly-Pro -Ala را در هر دقیقه در 25 درجه سانتیگراد هیدرولیز می کند . یك واحد پروتئین خنثی كازئین را هیدرولیز می كند تا رنگ معادل 1.0 میكرومول تیروزین در هر 5 ساعت در pH 7.5 در 37 درجه سانتیگراد تولید كند. یک واحد کلستریپین 1.0 میکرومول BAEE در هر دقیقه با pH 7.6 در 25 درجه سانتیگراد در حضور DTT هیدرولیز می کند.
یادداشت آماده سازی
• این محصول معادل کسری سولفات آمونیوم 40٪ اول از Mandl، I. و همکاران ، J. Clin است. سرمایه گذاری . ، 32 ، 1323 (1953). محلول ها به طور معمول با غلظت 1-2 میلی گرم در میلی لیتر در بافر TESCA (حاوی 50 میلی متر TES ، 0.36 میلی متر کلرید کلسیم ، pH 7.4 در دمای 37 درجه سانتیگراد تهیه می شوند).
موارد مشابه :
: